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蛋白互作-贝科新肽

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号
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基因法转化洋葱表皮细胞:

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。










什么是亚细胞定位?首先我们来看什么是亚细胞。细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位,是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序,亚细胞是比细胞结构更细化的结构,根据功能和空间分布的不同,细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器,即亚细胞,其结构一般只有在电子显微镜(EMs)下才能看到。它们的特点是在细胞内,功能和空间相互隔离,又共同协调维持完整的细胞功能。在一定范围内,亚细胞结构等同于细胞器,不过像细胞膜虽然可以叫亚细胞结构,但不是细胞器。每种亚细胞结构中都存在一组特定的蛋白质,亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。同时也只有在相同或相近的亚细胞位置上蛋白质间才会有相互作用。



为什么要提供GFP空载的对照图片?

(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

拍摄时为什么有明场通道?

(1)显示细胞状态,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。